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环氧富锌底漆染色测定根据荧光抗体的用途不同

作者 Admin 浏览 发布时间 15/01/15

    环氧富锌底漆非特异性染色测定根据荧光抗体的用途不同,可用相类似的抗原切片或涂片,倍比稀释荧光抗体,按常规染色,在标本上出现的非特异染色应显著低于特异性染色滴度,否则应采取消除非特异性染色的方法处理荧光抗体。吸收试验在荧光抗体中加入过量相应抗原,于室温中搅拌2h后移人4℃中过夜,3000rmin离心30rain,收集上清液,再用相应抗原阳性标本染色,结果应不出现明显阳性荧光。

    F(荧光素)P(抗体蛋白)的摩尔比值反映荧光抗体的特异性染色质量,一般要求FP的摩尔比值为12。过高时,非特异性染色增强;过低时,荧光很弱,敏感性低。FP比值可按下述方法进行测定。(1)蛋白质定量测定荧光抗体的蛋白质浓度(mgmL)(2)结合荧光素定量先制作荧光素定量标准曲线,即准确称取FITClmg,溶于10mL05molL(pH值为90)碳酸盐缓冲液中,再用001molL(pH值为72)PBS稀释到100mL,此时荧光素含量为10}xgmL,以此为原液。

    再倍比稀释9个不同浓度的溶液,用分光光度计在490nm波长测定光密度值(OD),以光密度为纵坐标,荧光素含量为横坐标,作标准函数图。荧光素与蛋白质结合后,其吸收光谱峰值向长波方向位移约5nmFITC和蛋白质结合后吸收光谱峰值由490nm变为493495nmRB抛和蛋白质结合后吸收光谱峰值变为595nm